發(fā)光試劑由化學(xué)反應(yīng)釋放的能量引發(fā)周圍的的物質(zhì)使其達(dá)到激發(fā)態(tài)，被激發(fā)的物質(zhì)再通過(guò)光輻射衰減能量回到基態(tài)的過(guò)程。

發(fā)光試劑的發(fā)光原理

由化學(xué)反應(yīng)釋放的能量引發(fā)周圍的的物質(zhì)使其達(dá)到激發(fā)態(tài)，被激發(fā)的物質(zhì)再通過(guò)光輻射衰減能量回到基態(tài)的過(guò)程。

發(fā)光試劑的分類及介紹

（1）魯米諾試劑：化學(xué)名：3-氨基鄰苯二甲酰胺。

以3-硝基鄰苯二甲酸為原料與阱反應(yīng)，生成中間產(chǎn)物3-硝基鄰苯二甲酰一肚，繼而把后者分子中的硝基還原為氨基，即得到化學(xué)發(fā)光物質(zhì)——魯米諾。

（2）三苯基咪唑

三苯基咪唑在堿性介質(zhì)中被過(guò)氧化氫氧化，中間經(jīng)過(guò)二氧雜環(huán)丁烷衍生物階段，得到苯甲酰胺衍生物激發(fā)態(tài)，回到基態(tài)時(shí)發(fā)出熒光。

以氫化鈉/1,3-二甲基苯并咪唑作催化劑，苯甲醛在四氫呋喃中發(fā)生自身縮合得到2-羥基-1，2-二苯基乙酮。在1-丁基咪唑四氟硼酸鹽的存在下，后者與苯甲醛/醋酸銨發(fā)生反應(yīng)得到三苯基咪唑。

（3）光澤精化合物

9-氯吖啶在銅的催化下于140℃發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，得到9，9'-聯(lián)吖啶，后者用硫酸二甲酯N-甲基化，得到光澤精。

（4）過(guò)氧化草酸酯類：例如雙-草酸酯。

（5）吖啶酯類

McCap 等合成了一系列吖啶酯類化合物，對(duì)該類試劑的化學(xué)發(fā)光機(jī)理研究表明，發(fā)光效率與試劑中的可解離酸性基團(tuán)的 pKa有密切關(guān)系， pKa 一般應(yīng)小于 11 。

吖啶酯類化合物是一類很有前途的非放射性核酸探針標(biāo)記物，用作 DNA 的發(fā)光探針，發(fā)光量子產(chǎn)率高，穩(wěn)定性好，標(biāo)記物對(duì)雜交反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)和雜交體的穩(wěn)定性無(wú)影響，可以直接在堿性介質(zhì)中進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。

發(fā)光試劑的應(yīng)用

（1）有機(jī)酸

一般是先將有機(jī)酸衍生成熒光物質(zhì)經(jīng)色譜分離后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

在**醫(yī)學(xué)上，草酸是一個(gè)重要的檢測(cè)項(xiàng)目，可以直接用氧化化學(xué)發(fā)光反應(yīng)測(cè)定尿液和草酸二乙酯中的草酸鹽及游離的草酸。另外還可以測(cè)定苯酮尿癥病人的尿液的苯丙酮酸的含量。

此外酶聯(lián)偶合反應(yīng)也可以用于某些有機(jī)酸的化學(xué)發(fā)光分析。

（2）有機(jī)堿

有些堿如腎上腺素等可直接氧化而發(fā)光。

（3）氨基酸

氨基酸分析方法的改進(jìn)有利于推動(dòng)生物技術(shù)、基因工程、 DNA 重組和基因克隆等的發(fā)展。由于*大多數(shù)氨基酸沒(méi)有內(nèi)源熒光特性，因此用過(guò)氧草酸鹽體系測(cè)定氨基酸需將其衍生成熒光物質(zhì)。

（4）糖類

光澤精體系可用于測(cè)定一些還原性物質(zhì)，如乳糖、葡萄糖，用于抗壞血酸和脫氫抗壞血酸的分析測(cè)定有很高的靈敏度。

發(fā)光試劑的使用注意事項(xiàng)

（1）實(shí)驗(yàn)前，先將實(shí)驗(yàn)中所需的所有試劑及待測(cè)樣品從冰箱中取出，待溫度與室溫（25℃）平衡1小時(shí)以上后使用。

（2）加樣前應(yīng)將所用試劑和待測(cè)樣本分別充分混勻。

（3）酶結(jié)合物和抗體混勻時(shí)，切忌產(chǎn)生大量氣泡。

（4）實(shí)驗(yàn)中用于凍干品復(fù)溶和稀釋濃縮洗滌液所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。

（5）凍干品加入蒸餾水或去離子水后，應(yīng)蓋上膠塞后靜置，待固體物質(zhì)完全溶解后，再將試劑瓶反扣在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，讓附著在瓶蓋上的固體物質(zhì)溶解，然后充分混勻后待用。

（6）試劑每個(gè)批號(hào)均*立優(yōu)化，請(qǐng)不要混用或稀釋本試劑以免降低敏感性。

（7）適當(dāng)?shù)胤忾]和洗滌膜片**關(guān)重要。使用前配置化學(xué)發(fā)光試劑，配置足夠覆蓋膜片即可，棄去使用過(guò)的混合試劑，使用干凈取樣頭取用每種試劑。

發(fā)光試劑盒的保存

（1）保存條件

① 試劑盒應(yīng)放置于2～8℃冰箱中存放；

② 試劑盒在取用過(guò)程中禁止顛倒，以避免試劑被污染；

③ 有特殊要求的試劑應(yīng)嚴(yán)格按照操作說(shuō)明書要求的保存條件保存。

（2）保存時(shí)間

① 未開(kāi)封試劑盒于2～8℃保存時(shí)，可在有效期之內(nèi)正常使用；

② 已開(kāi)封試劑盒每次使用后需及時(shí)放回2～8℃冰箱內(nèi)保存，應(yīng)盡可能在開(kāi)封后1個(gè)月內(nèi)使用（按說(shuō)明指示的開(kāi)封的半成品有效期計(jì)算，盡量在半成品的有效期內(nèi)用完）。

檢測(cè)項(xiàng)目

主要有血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、心肺功能性檢查、生化檢驗(yàn)、血清免疫檢驗(yàn)、微生物檢驗(yàn)、血液及骨髓學(xué)檢驗(yàn)、組織切片病理檢查等。

應(yīng)用場(chǎng)景

一般在醫(yī)院的檢驗(yàn)科或者化學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用。