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PCR儀是用來做什么的

作者:春天 日期:2025-06-17 人氣:143

PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀,是利用PCR技術對特定DNA擴增的一種儀器設備。


PCR儀的工作原理

PCR屬于一種用來放大擴增特定DNA片段的分子生物學技術,能夠看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的大特點,就是能夠把微量的DNA大幅增加。




不管是化石中的古生物、幾十年前兇殺案中兇手**下的毛發(fā)、皮膚或者是血液,只要能夠分離出一丁點的DNA,那么就可以使用PCR來放大,進行對比。




PCR是利用DNA在體外攝氏95度高溫時變性時會變成單鏈、低溫時引物和單鏈按照堿基互補配對的原則來結合,再調溫度到DNA聚合酶適反應溫度,DNA聚合酶沿著磷酸到無碳糖的方向合成互補鏈。給予聚合酶制造的PCR儀實際上就是一個溫控設備,能夠在變性溫度、復性溫度以及延伸溫度之間進行很好的控制。




DNA的半保留復制可以說是生物進化和傳代的重要途徑。


PCR儀的分類

普通PCR儀:只進行PCR擴增的PCR儀,實際上是一個溫控設備。只能實現(xiàn)DNA的擴增,分析檢測需要在擴增之后。而擴增后到檢測分析的這個過程中,要將樣品中儀器中取出來,容易受到污染和污染環(huán)境。




實時熒光PCR儀:在普通PCR儀的基礎上增加熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng)。在作為溫控設備的同時加入熒光分析系統(tǒng)。




PCR儀是用來做什么的

所采集到的樣品含量太低,無法正常的用儀器進行檢測分析時需要通過PCR儀PCR技術來實現(xiàn)樣品擴增,擴增的倍數(shù)2N次方。




通過這個技術,可以用于:




(1)分子生物學研究:核酸定量分析,基因表達差異分析等等。




(2)醫(yī)學研究:產前診斷,病原體檢測如**近的新冠病毒等等方面。


PCR儀怎么選擇

標準 PCR儀主要是產生大量的核酸序列供后續(xù)實驗使用,比如測序、克隆,或僅僅是為了在凝膠上看看有沒有合適的條帶。




QPCR則是實時定量靶序列,通常被用來測定生物分子的豐度,而不是生成終產物?!坝辛薗PCR,研究人員就不再關心PCR 產物發(fā)生了什么。




數(shù)字PCR也是定量的,但并非實時。反應發(fā)生在大量的微小分區(qū)中。這些分區(qū)很小,其中每個可能包含0或1個DNA分子,通過計算陽性反應的數(shù)量,研究人員能夠真正定量DNA。這比 QPCR更為靈敏,也不需要標準曲線。




對于標準PCR儀和定量PCR儀之間的選擇,研究人員通常都心里有數(shù)。數(shù)字PCR通常能提供一個更好的答案,更明確的答案。


PCR儀的校準參數(shù)

在反應的過程中,溫度示值與設定值是否準確,這是**個溫度示值誤差;因為我們需要升溫,降溫,升溫,這是不是涉及到一個速率的問題,升降溫的快慢,會直接影響到整個反應過程,所以,升降溫速率也是我們需要考量的一個方向。




儀器通過加熱模塊去控制溫度,在快速升降溫的過程中,儀器不可避免的會先升高/降低溫度之后,再達到所設定的問題,這就是溫度的過沖,這也是可能也是一個考量的指標。




達到一定的溫度之后,儀器要平衡一段時間,而溫度平衡的時間和設置的時間,是否一致,也是要考慮的一個方向。




不同的DNA模板,需要的溫度和解鏈的時間不一樣,如果解鏈的時間沒達到要求,DNA沒有完全變性,在降溫復性的過程中,會恢復到天然的狀態(tài)。




PCR儀有48孔、96孔,384孔,每一個孔都可以放一個樣品,自然我們上面所說的溫度參數(shù),還是有一些不全。




這里大致總結一下:溫度示值誤差、溫度均勻性、溫度**大沖量、溫度持續(xù)時間準確度、平均升降溫速率,**大升降溫速率等。


(文章來源于互聯(lián)網)

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