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產(chǎn)品百科

薄層色譜法實踐經(jīng)驗大總結(jié)

作者:春天 日期:2025-06-16 人氣:149

別以為有了HPLC,薄層色譜(TLC)就過時了,USP、BP很多產(chǎn)品的有關(guān)物質(zhì)檢測還使用的是TLC。相比HPLC,TLC廉價、方便、易得。**合成領(lǐng)域,TLC的鋪板、點板、分析是每一個合成人員入門時**備的素質(zhì)。

概述


1. 藥典:薄層色譜法系將供試品溶液點于薄層板上,在展開容器內(nèi)用展開劑展開,使供試品所含成分分離,所得色譜圖與事宜的對照物按同法所得的色譜圖對比,并可用薄層掃描儀進行掃描,用于鑒別、檢查或含量測定。

2. 如果你是做鑒別的話,薄層的系統(tǒng)適用性主要是做檢測限和分離度;
3. 如果你是做含量測定,比如說用薄層掃描法,薄層的系統(tǒng)適用性應(yīng)該做線性范圍、同板精密度、異板精密度、回收率;
4. 手工鋪制的板子,只適宜于定性分析,不宜于分離定量;
5. 化學藥一般是作有關(guān)物質(zhì),需要一定的載藥量,所以要適當增加厚度;
6. 中藥一般較難分離,需要薄板,以增加分離度;
7. 手工鋪制的板子常用的有:硅膠G板和硅膠CMC-Na板。前者是煅石膏(石膏經(jīng)140℃烘烤3—4小時)與硅膠按1—1.3:10混合均勻。每份硅膠G加水2—3份調(diào)成糊狀,即可使用。后者的操作各位大蝦已有論述。
8. 如果你鋪板目的是做分析用的話,肯定得很仔細用心;如果僅是天然藥化那種粗略檢查過柱子得到的餾分純度,那就沒有**要這么復雜了,也就是說速度可以快點,板的要求也沒有**要這么高;
9. 單純的手鋪板,技巧要求很高的,如果有鋪板器(也是完全手動的那種),鋪出的板子基本上可以保證均一的。
10. 要噴硫酸乙醇并定量的**好鋪水板;鋪水板是**考技術(shù)的,主要是碾磨技術(shù),大家可以探討一下;
11. 硫酸乙醇顯色作定量分析的品種,但凡加了CMC-Na的板都易烘糊,尤其是溫度高于100度時,后改用不加CMC輔的水板來作,就不會有烘糊現(xiàn)象,故也可推論CMC易于與硫酸起糊化反應(yīng)。感覺輔水板關(guān)鍵是硅膠G與水的比例要達1:3.5左右,而且研磨后要盡快涂布,不能易于凝固而難于涂布。

展開

12. 藥典:展開容器 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,并有嚴密的蓋子,底部應(yīng)平整光滑,或有雙槽。上行展開一般可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸,展開時須能密閉。水平展開用專用的水平展開缸。
13. 藥典:將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜(切勿將樣點侵入展開劑中),密封頂蓋,待展開**規(guī)定距離,除另有規(guī)定外,一般為8~15?。悖?,溶劑前沿達到規(guī)定的展距,取出薄層板,晾干,按正文項下的規(guī)定檢測。
14. 展開劑的選擇(分離單體):
(1)粗分,也就是當你的樣品極性范圍比較大的時候,可以直接采用極性較小的流動相。然后將前沿、原點以及前沿及原點間的硅膠分別刮下,提取。這樣,樣品就被分為幾個部分,而各個部分的極性相差也比較小了。然后再將這幾部分分別進行下面的細分TLC。
(2)細分。經(jīng)過粗分之后,我們一般對各個部分的極性都能夠做到心中有數(shù)了。比如,被沖到前沿的樣品,要采用更小極性強度的流動相,而死吸附部分,則需要較大強度的流動相。
我們在初步確定了流動相的極性強度之后,可以自己設(shè)計幾個溶劑系統(tǒng)。在選擇流動相的組成的時候,可以參考snyder的溶劑分類,從質(zhì)子受體,質(zhì)子給體和偶極作用的溶劑中各選擇一種,然后再選擇一個強度調(diào)節(jié)劑。當然,也可以參考文獻中采用的流動相。選好了要用的流動相,就可以根據(jù)我們初步確定的極性強度得到流動相的配比了(如果是二元流動相的話)。如果是三元及以上的流動相,可以采用Glajch和Youngstrom的七種溶劑系統(tǒng)的方案進行選擇流動相的配比。然后從中選擇分離效果比較好的組合。
**開始可以采用微量圓環(huán)法(將樣品點在中間,然后將流動相用毛細管從原點向圓周擴散)和小板實驗法來摸索,然后再應(yīng)用于大的制備TLC。
我也曾直接采用圓環(huán)法,也稱為環(huán)形展開,來進行制備的。本來是應(yīng)該有專門的U形展開室來展開,但是因為我們這里沒有這個設(shè)備,所以我一般采用簡易的方法:即將樣品點在中央,然后用尖頭的滴管源源不斷的向圓心滴加流動相的。樣品會分出不同的同心圓而得到分離。這樣的好處有三:(1)只要操作小心,各個同心圓真的就非常圓,即不會出現(xiàn)線性層析中的邊緣效應(yīng)等。(2)分離效果更好,拖尾現(xiàn)象小于線性層析。(3)由于圓心式展開的Rfc是線性展開的Rf的平方根,要大于線性展開的Rf,所以分的更開。弊端在于將各個組分從板上刮下的時候需更小心才不會使之混雜。
15. 當展開劑極性差別很大時,特別是極性大的成分所占比例很小時,往往會出現(xiàn)溶劑脫混現(xiàn)象。在這種情況下,展開槽 飽和與不飽和差別沒有顯著性差異,薄層板上往往會出現(xiàn)類似分層的現(xiàn)象,所以只有換展開系統(tǒng)來調(diào)整。
16. 甲醇用量較小,而甲醇又易揮發(fā),容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng),要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。
17. 如果經(jīng)過一次展開后,展開槽內(nèi)仍剩下足夠的展開劑,可以展開第二塊板子嗎?
個人認為**好不要。一般來說為得到較好的分離效果,應(yīng)先飽和一下,第二次使用如果還要飽和就會造成另一側(cè)殘留的展開劑附著在板子上,造成影響。而且有機溶劑一般較易揮發(fā)。
18. 自己手鋪的薄層板怎么都沒有買來的**板好用,用過之后也可以用極性大些的展開劑將展開的點,二次展開跑過,這樣就可以重復利用了。

顯色

19. 藥典:顯色裝置 噴霧顯色要求用壓縮氣體使顯色劑呈均勻細霧狀噴出;浸漬顯色可用專用的玻璃器皿或用適宜的玻璃缸代替;蒸氣熏蒸顯色可用雙槽玻璃缸或適宜大小的干燥器代替。
20. 說關(guān)于薄層板加熱變黑的問題,其實很容易解決:當噴完顯色劑后不用在放烘箱里烘了,可以用電吹風在板子背面吹吹就能顯色了。我們實驗室里一般都采用此法,簡便、快潔.如果一非想使用烘箱烘的話,一定要用帶玻璃窗的,當看到顯色了就取出,不然不好控制顯色時間,時間過長,CMC容易碳化變黑。
21. 根據(jù)我的經(jīng)驗,薄層版變黑與CMC-Na的濃度過大有關(guān),如果你留意的話,你會發(fā)現(xiàn),當顯色劑中有濃硫酸時,加熱時間稍長就會變黑(其他顯色劑是沒事的),我老師說這是因為濃硫酸把CMC-Na炭化了,其實分子材料的溶解**然都會有一個溶脹,溶解的過程,所以配制的時候,應(yīng)該將稱好的CMC-Na少量的撒在水的表面,讓其自然沉降,注意要散開平鋪,這樣能夠充分浸潤,使其溶脹,之后可以置于水浴鍋內(nèi)加熱溶解;當然如果你不是很急著用的話也完全可以,直接用水泡著放那,估計十天半月的也可以用了。
45. CMC-Na的溶解需要煮????藥檢所的老師用一個大缸子裝水,按比例加入CMC-Na,讓他自然溶漲、溶解,臨用前用漏斗,加脫脂棉,濾過即可;
46. 根據(jù)我的經(jīng)驗,薄層版變黑與CMC-Na的濃度過大有關(guān),如果你留意的話,你會發(fā)現(xiàn),當顯色劑中有濃硫酸時,加熱時間稍長就會變黑(其他顯色劑是沒事的),我老師說這是因為濃硫酸把CMC-Na炭化了,其實[color=blue=這種情況你只要適當降低CMC-Na的濃度就可以了,當然如果不加CMC-?。危岬脑捜菀装寻迮?;
47.?。茫停茫危崛芤褐罅艘院蟛荒茉儆美渌畠?,否則,幾天以后就會變綠,起霉。
48.?。茫停茫危嵬耆芙夂螅貌际下┒愤^濾。

鋪板

49. 選擇合適的薄層板(如:20×10?。悖恚?,清潔干凈(先用洗手液或洗衣粉清洗,再用自來水沖洗干凈,接著用蘸有乙醇的棉花擦拭干凈,**后把板吹干或烘干),放置于清潔處,備用。
50. 玻璃板應(yīng)該很干凈,沒有劃痕,沒有缺口,4個角要“健全”。
51. 載板要求平滑清潔。在使用前一定要處理干凈,用洗滌液或肥皂水洗滌,再用水沖洗干凈,烘干。
52. 清洗玻璃板相當重要,切記要清洗得相當干凈,不然會在鋪板中產(chǎn)生小氣孔。
53. 薄層板**好用洗潔精浸泡1~2小時,這樣比較容易清洗,清洗后薄層板依柱豎起,半小時即可晾干。
54. 板子一定要洗干凈,用適中濃度的鹽酸浸泡是一個不錯的選擇。
55. 板要**干凈。
總結(jié):完整、平滑、清潔!
56. 硅膠和粘合劑的比例不用固定,稀點鋪薄板,稠點鋪厚板,以目的決定比例。
57. 硅膠的研磨,當然是一個方向了,可以適量的加入一定量的無水乙醇或丙酮來消泡,也可以適當攪拌后放在干凈容器內(nèi)超聲,效果都是不錯的。手工鋪硅膠的用量一般 10×20?。悖淼募s3~4克,硅膠和CMC-Na的用量一般是1:2.8~3,具體根據(jù)要鋪板子的厚度和CMC-Na的濃度決定。
58. 40%硅膠:按CMC溶液的量、按40%的比例稱取薄板層析硅膠,倒入大研缽中,與CMC溶液混合,充分研磨成均勻糊狀。
59. 先在研缽中加CMC溶液,再加硅膠,按同一方向研磨,這樣更容易調(diào)勻不易包埋硅膠顆粒;稠度以用研棒粘取,成連珠狀不成線狀下滴為好;配制時遵循現(xiàn)配現(xiàn)用、少量多次的原則,因其易干影響鋪制效果。
60. 硅膠和CMC-Na溶液的比例可以適當?shù)恼{(diào)節(jié),根據(jù)你所需要薄層板的軟硬來微調(diào)??梢砸粋€人研磨,一個人緩慢的倒CMC-Na溶液。研磨時**能考驗?zāi)愕亩?,我覺得你該找女生來磨,但是那種太文弱的不行。研磨時要順著一個方向,速度不宜快,要順著研缽的邊緣,觀察仔細,一定要把氣泡趕盡殺絕。研磨好的因改是均勻的,沒有氣泡,沒有固體的粉末類異物,溶液有一定的粘性。
61. 硅膠的濃度要適中。太稀鋪板時易淌出,同時延長板的干燥時間;太稠,流動性不好,鋪板是靠其流動性的,同時也很可能在沒鋪好前凝固。
62. 建議硅膠應(yīng)配制成偏稀的狀態(tài),這樣鋪制更容易,不**辛苦地顛好久,而且可多可少,可薄可厚。
63. 我的經(jīng)驗是CMC-Na與硅膠配成?。常海北容^合適,CMC-Na用千分之三到千分之五,硅膠濃度稍大一些或小一些也行,但不能太低,否則板子邊緣會凹凸不平。
64. CMC-Na:硅膠為2.5:1較好,樓上師兄說的3:1應(yīng)該也可以,但是硅膠配的過稀時后果很嚴重,板子在晾干時會出現(xiàn)許多裂縫,象萬壽菊樣的開花狀,完全不能用。
65. 充分磨好硅膠,后,再邊磨邊加CMC-Na溶液;鋪的時候,如果慢且多,那么有時會干了,你還要邊磨邊放點CMC-Na溶液。
66. 研磨時防止氣泡可以加少量的乙醇或者丙酮;加入幾滴乙醇或丁醇,可起到消泡的作用。
67. 加長研磨的時間,勿太厚,避免板子炸裂。
68. 超聲的排氣效果很好。
69.?。埃矗ァ。茫停茫危崛芤海ǎ保海常┲醚欣徶?,朝一個方向慢慢研細約10~15分鐘,10g吸附劑加入3滴95%乙醇以驅(qū)趕氣泡;
70. 硅膠的研磨時間:如果嚴格規(guī)定的話,需在一分鐘內(nèi)完成,從加入CMC溶液到吸附劑中**涂布結(jié)束,應(yīng)在四分鐘內(nèi)完成
71. 硅膠與CMC-Na溶液的比例根據(jù)硅膠型號的不同而不同:硅膠G或硅膠GF254比例一般為1:2 ~?。保海?,硅膠H或硅膠HF254比例一般為1:3 ~ 1:4。
72. 研磨的時候確實需要沿一個方向研,不要敷衍
73. 硅膠研磨要充分,防止氣泡。
74. 實在怕有氣泡,可以超聲一下。
75. 藥典:薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水(或加有黏合劑的水溶液)在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2~0.3?。恚恚∠峦亢帽拥牟0?,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃ 烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。表面應(yīng)均勻,平整,無麻點、無氣泡、無破損及污染。
76. 薄層板的厚度:如果定性分析,一般厚度以0.25?。恚頌楹?;如果要分離制備少量的純物質(zhì)時,厚度應(yīng)稍大一些,常用的為0.5 mm-0.75?。恚恚?*有1?。恚恚病。恚淼摹?br style="margin: 0px; padding: 0px; max-width: **; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important;"/>77. 鋪板,我覺得是各人各喜歡,可以順著板中間倒,也可以順著某個邊緣倒,倒時也要注意不能引入小氣泡。可以用玻璃棒引著溶液平鋪在玻璃板上,如有需要,可以雙手10個指頭拖住玻璃板,有節(jié)奏的顛,使得硅膠分攤勻稱。尤其是4個角,容易高出玻璃板其他部位,所以要格外注意。顛好的板,表面看上去要光滑平整,沒有氣孔。
78. 將薄層用硅膠粉稱定加入3倍量的CMC-Na溶液,研磨均勻(勻速一個方向)成糊狀(我用1分鐘左右),不要靜置迅速將涂料倒于備好的玻璃板(事先清洗干凈,不可有污漬、水滴。)自上而下自然流注鋪于玻璃板,倒量為距離邊緣3厘米左右即可(鋪厚板用量適當多些,薄板量少些),然后用研缽棒涂布玻璃板上。顛板(上下左右或傾斜根據(jù)板的涂布情況而定)。鋪好的板要選擇一個水平、通風的平臺放置,不可落上灰塵。
79. 依據(jù)薄層板使用需要,將適量研好的吸附劑倒到薄層板上,先用小錘將吸附劑蕩勻,傾斜層析板,使吸附劑流**層析板一側(cè),待吸附劑蓄積一定量后,再反向傾斜層析板,使吸附劑回流;然后是另外兩個方向,重復上述操作,后輕顛幾下薄層板即可。
80. 將吸附劑制備好后,直接將適量傾倒于玻板的中央處,接著用研棒輕輕將吸附劑溶液向四周攤勻,然后開始顛玻板;顛的時候可要注意啦:一定要輕輕的顛,從玻板的一頭顛到另一頭,然后反過來進行。重復幾次即可。
81. 將研好的糊糊倒在干凈的板上,我一般是從中間一次性倒下去,然后用左手托板,輕輕傾斜,使糊糊向板邊緣流動,右手拿研棒將沒鋪到的地方涂均勻,但要注意研棒在接觸糊糊一直到**后涂抹均勻才能離開板,一旦提起就不能再去涂抹,否則會留下痕跡。涂抹結(jié)束后,就顛板啦,我的經(jīng)驗是顛的幅度不易大,但頻率可以快些。
82. 顛板。此過程要與前面步驟連續(xù)進行,且不宜久顛,以保證顛好后硅膠還有一定的流動性,放置到平臺時仍可以靠自身流動修正顛板及移動所產(chǎn)生的不均。
83. 將載玻片置于平臺上,用藥匙舀取糊狀硅膠,均勻地鋪在載玻片表面。
84. 鋪板時,用的硅膠量要掌握好。
85. 將硅膠倒入在盛有CMC-Na溶液的研缽中,CMC-Na溶液的濃度不宜過高,研磨均勻,大約5-10分鐘,用研棒粘取,成珠滴為好,鋪板,兩面顛簸**平放置平臺上。
86. 載玻片的涂布:將干燥后的載玻片兩片夾在一起,沉浸入糊狀物中,使在載玻片上形成固體層.為了浸蕉一對載玻片,用你的指間夾住載玻片的一端,并盡可能地向下進入所提供的糊狀物中.當載波片一浸入糊狀物中后,立即以快而平穩(wěn)的速度將其拉出,并讓過量的糊狀物滴回.小心的分開載玻片,放到水平臺上,干燥.(注意:糊狀物一定要均勻;要迅速拉出載玻片,大多數(shù)人拉得太慢)
87. 研磨硅膠時,我一般?。常啊。绻枘zH,加入5%的CMC-Na 100?。恚?,研磨,當將研棒提起時,硅膠象成溜似的滴下為正好。
88. 鋪完板后,**好將兩邊的邊緣修理一下,并且各個邊緣都要擦干凈,這樣可以避免跑歪。
89. 邊緣壞一點可以用刀子刮去整齊的一條。
90. 對鋪好的板要選擇平整的地方,自然干燥,不易人為強制干燥。干燥后再活化,否則板會開裂。
91. 鋪好的板,要找個干凈的地方放置晾干,這個過程也是耐心的等著它,請勿打擾。
92. 板鋪好后,自然涼干**好,一定是要從玻板后看也是干的,注意一定要放平,**好控制空氣流動。
93. 板子鋪好之后一定要放在平面上陰干(一定是陰干,不然你會后悔的),如果看熒光**好是找一個比較干凈的房間,不然熒光下板子上會有很多點點。
94. 要等陰干且透后才能放入烘箱干燥活化時。還有一點,鋪板和涼板時周圍的環(huán)境要好,桌面要干凈,**怕是有粉塵,如有粉塵落在未干的板上可就慘了,定量不行,可以定性,但不好看。
95. 自然干燥后,放入烘干箱烘12小時以上。
96. 薄層板鋪好后一定要放置在平的臺面上,否則難保證板面硅膠的厚度均勻。
97. 鋪制好的薄層板先讓其稍干后,即看不出有明顯的水印,放入烘箱內(nèi)用50度以下的溫度并開鼓風干燥30分鐘,再升溫干燥**干,注意升溫過快在使用的過程中有可能發(fā)生起層的現(xiàn)象,不利于分離,以上方法經(jīng)本人兩年多的實踐,效果較好且耗時又不太長。
98. 置平整處過夜自然晾干;如使用較急亦可60℃烘干。

活化

99. 活化的目的是除去水分。
100. 自然晾干后,活化一下(105攝氏度40分鐘左右),置于密封的干燥器保存。
101. 再在105~110℃活化,活化時間為0.5~1小時,冷卻后即可使用。
102. 厚板在活化時容易裂,考慮到化學藥相對容易分離,所以降低活化溫度,自然晾干后,40或60攝氏度的烘箱中2~3小時即可,干燥器中保存。
103. 用于分離中藥的薄板需要活化,活化后要立即使用,可以稱熱點樣飽和,不然空氣中的水分會導致你作無用功,使得吸附色譜轉(zhuǎn)為分配色譜。
104. 薄層烘干的時候**好不要在帶鼓風的烘箱中烘,容易起皺,或者破裂。

點樣

105. 藥典:點樣器 一般采用微升毛細管或手動、半自動、全自動點樣器材。
106. 藥典:除另有規(guī)定外,在潔凈干燥的環(huán)境中,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點狀或窄細的條帶狀,點樣基線距的底邊15~20?。恚?,**板一般基線距底邊 8~10?。恚?,圓點狀直徑一般不大于3 mm,**板一般不大于2?。恚?;條帶狀寬度一般為5~10?。恚?。**板條帶寬度一般為4~8?。恚?,可用專用半自動或自動點樣器械噴霧法點樣。點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。一般不少于8?。恚恚?*板供試品間隔不少于5?。恚?。點樣時**須注意勿損傷薄層板表面。
107. 點樣,可以用進樣器,也可以用定量毛細管(有點貴啊,5ul的2塊多一根),點樣時盡量使點小且圓整,盡量不要破壞板子。
108. 毛細管點樣,點樣量不能控制。你可以到藥店買1~2ml的注射器作為點樣器,可以滿足TLC鑒別的要求,而且很便宜哦!
109. 點樣,我上學的時候,老師用比較便宜的進樣器(大約10幾塊錢吧,10μl即可),將針尖打磨圓滑,老師好像是用銼一點一點銼的,這樣點樣的時候樣品溶液不容易沿針尖上行(甲醇溶液都這樣),并且針尖不會刺破已經(jīng)鋪好的薄層板。現(xiàn)在,我和師兄都是實行的這個辦法,還是比較實用的,點樣量可以精確到?。埃担浚?。當然,點樣的時候手不能抖動,動作要輕
110. 要磨平微量進樣器的針尖,簡單的方法就是,在展缸的蓋子上輕磨(當然是靠近中間部分),就很快能解決問題 ,且很平滑。
111. 關(guān)于點樣:我們一直都用液相平頭進樣針,10?。酰炀蛪蛄耍绻c樣量低于1ul的話,就用氣相進樣針。都可以很好的控制點樣量,且斑點也可以滿足要求。速度也快。可以避免毛細管先快后慢的毛病。
112. 用定容毛細點樣管:5 ul ,2?。酰?,1 ul。
113. 對于點樣我也有些心得。原來有專門的點樣管,是10 ul規(guī)格的,是點10 ul的好說,反正點完就是了,但要點5ul或更少,那就全憑眼力了,做得是一點把握沒有啊,但還得點,呵呵。自從發(fā)現(xiàn)可以用微量進樣器后,不僅可以控制的得心應(yīng)手,不會因為一按不穩(wěn)把藥液給全點上去導致斑點過大,還可以重復利用節(jié)省開支,重要的是還環(huán)保。呵呵!提倡廣大的兄弟姐妹也用微量進樣器替代塑料的點樣管,經(jīng)濟又好用。

平衡與飽和

114. 藥典:展開前如需要溶劑蒸氣預(yù)預(yù)平衡,可在展開缸中加入適量的展開劑,密閉,一般保持15~30分鐘,溶劑蒸氣預(yù)平衡后,應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板,立即密閉,展開。如需使展開缸達到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài),則須在展開缸的內(nèi)側(cè)壁上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封頂蓋,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。
115. 飽和也非常重要,邊緣效應(yīng)很嚴重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內(nèi)壁,這樣飽和效果會好一些。
116. 在層析缸口涂適量凡士林,增加密封性。
117. 層析缸在展開前**好平衡一個小時左右,讓里面的展開劑平衡。也可以在兩邊放濾紙條,增加展開劑的散發(fā)面積,減少邊緣效應(yīng)。
118. 以展開劑邊緣效應(yīng)的大小,確定展開劑平衡時間的長短,一般平衡時間在30分鐘即可。


(文章來源于互聯(lián)網(wǎng))

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